[求助]请问15N标记蛋白做三维实验前应做哪些实验准备，万分感谢

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本人以前是做多肽结构的，现有一90残基的15N标记蛋白想测结构，有些问题想请教做过的各位大师，请好心人指点，谢谢！

 

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问题1：前期准备工作应做哪些？我现在知道的有以下几个，不知是否必要，

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1. 蛋白样品的1H90度（是否需要用zgpr压水）

2.15N的90度

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3.1H-15N HSQC（是否必须？）

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问题2：只是15N标记，要测的三维实验有哪些，我知道的有：15N-TOCSY,15N-NOESY,不知是否还需测HNHA,HNHB,我用CYANA算结构

 

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问题3：我的样品浓度能到1.5mM，不知ns设多少合适，一个三维实验大概需要多长时间?

 

 

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想做什么样的三维实验？90个残基，一般来说只用N15标记可能不够了，需要C13的标记，先解骨架的序列。

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一般先做正常的二维HSQC，做buffer的筛选，得到一张分辨率足够好的图，每个信号都清楚，如果到1.5mM一般估计一次HSQC做4-8 Scan就够了，浓度差不多了。

 

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压水是肯定的了

2 f' M7 B K. w

 

你如果还没有筛选到buffer，就不要先做后面的了，没用

[此贴子已经被作者于2010-5-26 21:41:43编辑过]

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