请教各拉老师蛋白质前处理和测定的步骤

xiaopu

请教各位老师~~~

我是新手，现在单位想测蛋白质的结构，但是我们这里没有低温探头~有一个微量探头~~

- m) n" |/ R% o: ^

蛋白质的前处理有什么要求吗？

6 b8 D5 I! a7 \3 U, V6 d

还是测定时要注意什么？

) }# A" ^+ v; G( G( D

谢谢

abchjh

俺也想多知道点事情．据说用低温探头就相当于机器升了一个级别。不知道有没有那么神。

bluecatalyst

请问你的蛋白有多大？一般70个左右可以不用同位素标记，再大就要15N、13C等同位素标记了。如果用了同位素标记的样品，NMR仪器最起码就需要有3通道及相应的探头。

蛋白样品需要一定的浓度（大于等于0.5 mM）、一定的稳定性（因为需要在一定的温度下采一套谱图）。

freeboy77

低温探头对测蛋白不是必须的

5 X% @ k( r& D+ t2 N

 

2 b/ ?2 k6 a( _& Z, \& a

低温探头提高的主要是灵敏度，600的低温探头灵敏度要高于800的普通探头。但是对分辨率没有提高。另外低温探头水峰抑制要更困难一些，或者说抑制效果要差一些。

+ W" I* a7 r, ^/ j

 

$ P. r8 Q6 _% I5 T9 k0 U

如楼上所说，超过70个氨基酸的蛋白需要15，C13标记，核磁实验需要三共振实验，因此需要三通道仪器和三共振探头

9 G) \8 f9 x, ^+ L1 ] a# Y& ~$ g, _

 

1 t+ Y! {" u: t! x7 K

蛋白样品需要在实验温度下稳定一周以上，最好能稳定一个月