请教各拉老师蛋白质前处理和测定的步骤

xiaopu · 发表于 2009-4-10 19:48:04

请教各位老师~~~

我是新手，现在单位想测蛋白质的结构，但是我们这里没有低温探头~有一个微量探头~~

蛋白质的前处理有什么要求吗？

还是测定时要注意什么？

谢谢

abchjh · 发表于 2009-4-11 02:49:08

俺也想多知道点事情．据说用低温探头就相当于机器升了一个级别。不知道有没有那么神。

bluecatalyst · 发表于 2009-4-14 10:41:09

请问你的蛋白有多大？一般70个左右可以不用同位素标记，再大就要15N、13C等同位素标记了。如果用了同位素标记的样品，NMR仪器最起码就需要有3通道及相应的探头。

蛋白样品需要一定的浓度（大于等于0.5 mM）、一定的稳定性（因为需要在一定的温度下采一套谱图）。

freeboy77 · 发表于 2009-4-22 19:08:42

低温探头对测蛋白不是必须的

低温探头提高的主要是灵敏度，600的低温探头灵敏度要高于800的普通探头。但是对分辨率没有提高。另外低温探头水峰抑制要更困难一些，或者说抑制效果要差一些。

如楼上所说，超过70个氨基酸的蛋白需要15，C13标记，核磁实验需要三共振实验，因此需要三通道仪器和三共振探头

蛋白样品需要在实验温度下稳定一周以上，最好能稳定一个月

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