[求助]我是超级菜鸟，请教低级问题

xiaohanl1983

我是个NMR的超级菜鸟，导师逼着做，什么也不懂，快急死了，所以来这里求救，望大家帮帮忙，感激不尽！

实验简介：目的：想用NMR检测氟中毒与正常（羊骨）的胶原蛋白结构有何不同。

                  胶原蛋白的基本单位称原胶原蛋白，它是由大约1000个氨基酸基构成的α― 

                  肽链所组成，其分子量约为30万。根据α―肽链结构与组成的不同，可将其 

                  分为由两种不同的α肽链，即由两条α1（I）肽链和一条α2（I）肽链所组成 

                  的I型胶原和由三条相同α肽链所组成的II、III、IV型胶原。它们均具有重复 

                  的三重序列结构（甘氨酸―X―Y）n。X和Y可为不同氨基酸残基的三分之 

                  一。现已阐明：α1（I）链具有1056个氨基酸残基，其中1014个组成连续的 

                  三重体。非三股螺旋区部分，称之为末端肽，有16个N端残基和26个C端肽 

                  构成三股螺旋的伸展部分。α2（I）肽链同样具有构成三重结构的1014个氨 

                  基酸残基。原胶原分子中不含色氨酸残基，酪氨酸残基也很少，所以分子的 

                  抗原性很弱，具有优良的生物相容性。酶解胶原蛋白分子式：CO(NH₂)₂。

                  胶原蛋白三螺旋结构如图。

                 

问题：

1：-20°C保存的样品（羊骨）还能不能做NMR，大约半年了?

2：我现在最郁闷的问题就是样品的制备，怎样从骨头里提取并纯化I型胶原蛋白？

      提取的胶原蛋白三条链是否已经解开？更或许是一段段的短肽链？我该如何处理我的样品？

      是不是必须得用C13和N15标记（怎样标记）（有书上说，分子量大于8000的需标记）？

3：氟（自然界最活泼元素），根据您的经验，它最可能攻击胶原蛋白的哪里？

4：是不是得预先知道胶原蛋白的氨基酸序列才能做NMR？

我的联系方式如下：

hantian212@sina.com

QQ：22534683（标明小韩NMR）

多谢各位指教！

祝NMR人事事顺利、步步高升！

celan

即使对NMR有所了解的人做这样的研究也是有难度的。

-20°C保存的样品（羊骨）大约半年了，还能不能做NMR？我的意见是先测定个1HNMR看看。至少在600兆仪器上测定。

从骨头里提取并纯化I型胶原蛋白的方法可参阅文献方法。

暂不用C13和N15标记，同位素标记得有专门人做的，可能价格不低。

你的目的：想用NMR检测氟中毒与正常（羊骨）的胶原蛋白结构有何不同。我想是可以的。

我现在正为一个博士生解析血桨的NMR,目的是找出正常组和病组的区别，还要归属，图谱比较复杂。

xiaohanl1983

非常感谢您的回复！

NMR要求样品纯度很高，我想请教你们一般都用什么方法能使样品纯度达到那么高？

多谢！

$ g. F* ~4 L- Z) a' m5 w

[此贴子已经被作者于2007-7-14 12:02:24编辑过]

celan

以下是引用xiaohanl1983在2007-7-14 9:54:00的发言：

非常感谢，您的回答让我在渺茫中找到了希望，我还有一些问题，肯请您能再指点一下！多谢了！

1；假如我提取出了胶原蛋白，会不会因为分子量太大而不能做1HNMR?

2；听说做NMR要求样品纯度很高，我想请教你们一般都用什么方法提取能使样品纯度达到那么高？

3；比较两种蛋白质结构不同，都需要做哪些NMR ?我看了一些资料，看不懂，

     那么多NMR不知该用哪些，是不是把两种蛋白的结构都测定明白了才能比较？

      还是不用测定出全部结构，只测定部分原子的结构就成？

真是对不起，我的有些问题可能提得从根本上就是错的，请您见谅！

分子量大也能做1HNMR。

纯度问题，可按胶原蛋白的提取纯化方法，文献上可以找到。

都需要做哪些NMR ？可先做1HNMR。初步分析，然后决定再做什么。

比较两种蛋白的NMR差别，定性鉴定差别是什么。。

. [! Y1 w* ?' i6 o. z4 M- ]& n4 m; C

[此贴子已经被chasgone于2007-7-14 14:45:35编辑过]

% [4 I" |' `( g

xiaohanl1983

多谢！

工作顺利！

huzhenxin

"我现在正为一个博士生解析血桨的NMR,目的是找出正常组和病组的区别，还要归属，图谱比较复杂。"

Metabolomics? Nicolas 在这方面做了好多工作讷, 需要很多样品吧.

# D1 F, }: a& t" D- s! M, B2 \5 ?

 

3 T" g4 \) p. P9 M 7 ^- c, }$ Q) ~& h% e( n0 }0 `